《植物生理学报》 2008, 44(5): 860-864

小麦TaMBD2 原核表达载体的构建和诱导表达

孟凡荣¹, 司志飞¹, 刘昊英¹, 张问¹, 李永春², 尹钧^2,*

河南农业大学1 生命科学学院, 2 国家小麦工程技术研究中心, 郑州450002

通信作者：尹钧；E-mail: junyin57@yahoo.com.cn；Tel: 0371-63558203

摘　要：

构建了小麦甲基结合域蛋白基因 TaMBD2 的原核表达载体 pGEX-TaMBD2, 并在大肠杆菌 BL21 (DE3)工程菌株中 优化了融合蛋白 GST-TaMBD2 的诱导表达条件。结果表明, 用 0.3、0.5 和 1.0 mmol•L-1 的 IPTG 诱导后, 融合蛋白 GST- TaMBD2 均能有效表达, 以1.0 mmol•L-1 IPTG 诱导的效果最好; 从诱导表达的时间来看, 3 种浓度IPTG 诱导1 h 后融合蛋白 均开始表达, 且表达量随着诱导时间的延长而逐渐增加, 但在诱导 6 h 后的表达量增加幅度不大, 因此确定诱导融合蛋白 GST-TaMBD2 表达的最佳 IPTG 浓度为 1.0 mmol•L-1, 诱导时间为 6 h。

关键词：小麦; TaMBD2; 原核表达

收稿：2008-05-12   修定：2008-06-30

资助：国家自然科学基金(30300195)。

小麦TaMBD2 原核表达载体的构建和诱导表达

孟凡荣¹, 司志飞¹, 刘昊英¹, 张问¹, 李永春², 尹钧^2,*

河南农业大学1 生命科学学院, 2 国家小麦工程技术研究中心, 郑州450002

Corresponding author: ; E-mail: junyin57@yahoo.com.cn; Tel: 0371-63558203

Abstract:

构建了小麦甲基结合域蛋白基因 TaMBD2 的原核表达载体 pGEX-TaMBD2, 并在大肠杆菌 BL21 (DE3)工程菌株中 优化了融合蛋白 GST-TaMBD2 的诱导表达条件。结果表明, 用 0.3、0.5 和 1.0 mmol•L-1 的 IPTG 诱导后, 融合蛋白 GST- TaMBD2 均能有效表达, 以1.0 mmol•L-1 IPTG 诱导的效果最好; 从诱导表达的时间来看, 3 种浓度IPTG 诱导1 h 后融合蛋白 均开始表达, 且表达量随着诱导时间的延长而逐渐增加, 但在诱导 6 h 后的表达量增加幅度不大, 因此确定诱导融合蛋白 GST-TaMBD2 表达的最佳 IPTG 浓度为 1.0 mmol•L-1, 诱导时间为 6 h。

Key words: 小麦; TaMBD2; 原核表达